抗生素药品在做无菌检查时，采用的集菌仪薄膜法有时遇到阳性对照管生长不佳的问题。

主要原因是每张薄膜冲洗量500ml是绝对不可能把滤膜上残留的抗生素药物彻底冲洗干净的。

我们曾做过注射用利福霉素钠的无菌检查，因为该药物的外观性状是暗红色的。冲洗500ml的量后，明显在滤膜上有淡淡的暗红颜色存在。证实了：500ml冲洗量是不可能彻底冲洗干净的。由此，我们首先提出：冲洗后滤膜存在抗生素残留量。

建议用下列方法，可帮助冲洗滤膜较为彻底。相对对培养器的培养基的阳性试验菌影响极微，可以使阳性对照管的细菌生长良好，同时又能准确的检出样品中可能存在的微量细菌。我们又提出：酶洗膜。

1.   样品溶液取：替考拉宁原料药10克，用500ml纯化水溶解，加4.5克氯化钠，摇匀。经0.45um除菌抽滤，相当于注射用替考拉宁0.5克/瓶的20瓶。

2.   灭活剂：苏州生纳生物科技有限公司的替考拉宁酶（A）无菌检验专用，5ml/瓶；替考拉宁酶（B）无菌检验专用，5ml/瓶。

3.   冲洗液：pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液500ml/瓶，共6瓶。每瓶加入替考拉宁酶（A）2.5ml，摇匀。

4.   仪器

4.1.          集菌仪：浙江泰林生命科学有限公司HTY-601C。

4.2.          培养器：浙江泰林生命科学有限公司NKF330。

4.3.          培养器振荡仪：温州维科生物实验设备有限公司ZW-K。

5.   操作时，取冲洗液湿润培养器的滤膜。

6.   样品溶液通过滤膜。

7.   依次用冲洗液冲洗，每次100ml，每个培养器冲洗量1000ml。开启培养器振荡仪，使成动态情况，泵尽液体（用集菌仪的蠕动泵把培养器的液体尽量排出）。

8.   用注射器分别加入3个培养器各1ml替考拉宁酶（B），覆盖滤膜整个表面，泵尽；重复一次。此举可以去除滤膜内部结构的90%替考拉宁的抗生素残留。

9.   再用注射器分别加入3个培养器各1ml替考拉宁酶（B），覆盖滤膜整个表面，停留10分钟。开启培养器振荡仪，转速适当。

10.各加培养器培养基100ml，摇匀，加入阳性对照菌液大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（北京三药菌株，活性强）使用前在硫乙醇酸盐培养基活化（100CFU/ml）的1ml，摇匀。

11.在37℃培养。每天上午、下午轻轻摇匀。

12.结果表明：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌阳性对照管培养1天，生长良好。本试验适用于替考拉宁原料药和注射剂的无菌检查。灭活剂：替考拉宁酶（A）无菌检验专用；替考拉宁酶（B）无菌检验专用合并使用有良好的效果。

13.讨论：我们公司科研人员提出，冲洗后滤膜存在抗生素残留量和酶洗膜两个新概念。

抓住了抗生素无菌检查的试验关键点。

首先确定影响试验的重点：滤膜存在抗生素残留量，又科学制定酶洗膜方法，在pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液的每瓶加入替考拉宁酶（A）的2.5ml；冲洗量加大，每张滤膜为1000ml，使得无菌检查工作顺利进行。

附图：

培养器振荡仪

苏州生纳生物科技有限公司

2025.04.09