盐酸万古霉素属糖肽类抗生素，原料和口服制剂的微生物限度检查采用薄膜法检测，回收率应在50~200%的范围。

1.   样品溶液：取1克，加100ml的水溶解，摇匀。经0.45μm 滤膜除菌抽滤。

2.   灭活剂：万古霉素酶，6ml/瓶。

3.   操作

3.1.取样品溶液的100ml通过滤膜。

3.2.pH6.8磷酸盐缓冲液100ml冲洗1次；

3.3.取万古霉素酶2ml加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液400ml中，摇匀。冲洗3次，每次100ml，泵尽；

3.4.加1ml万古霉素酶，覆盖滤膜的整个表面，泵尽；重复一次；再加1ml的万古霉素酶，覆盖滤膜整个表面，停留10分钟，泵尽；

3.5.把相应的阳性对照菌液（100CFU）加入至剩余的100ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，通过滤膜，泵尽；再取1ml万古霉素酶，覆盖滤膜的整个表面，泵尽；取出滤膜，正面向上放平皿培养。

4.滤膜选择：

密理博公司无菌滤膜47mm，0.45μm（HAWG047S6）

5.阳性对照菌

5.1.大肠杆菌：使用前在液体培养基活化，并在滤膜上计数。

5.2.金黄色葡萄球菌：使用前在液体培养基活化，并在滤膜上计数。

5.3.枯草芽孢杆菌（北京三药）：使用前在液体培养基活化，并在滤膜上计数。

6.注意点

6.1.滤膜对细菌有讲究，我们筛选出上述介绍的密理博滤膜较为合理。

6.2.阳性菌需在使用前进行活化，且稀释后在24小时内使用。

7.结果

8.回收率

金黄色葡萄球菌的回收率：64%

枯草芽孢杆菌的回收率：63%

大肠杆菌的回收率：80%

苏州生纳生物科技有限公司

2025.4.23