抗生素药品在做无菌检查时，采用的集菌仪薄膜法有时遇到阳性对照管生长不佳的问题。

主要原因是每张薄膜冲洗量500ml是绝对不可能把滤膜上残留的抗生素药物彻底冲洗干净的。

我们曾做过注射用利福霉素钠的无菌检查，因为该药物的外观性状是暗红色的。冲洗500ml的量后，明显在滤膜上有淡淡的暗红颜色存在。证实了：500ml冲洗量是不可能彻底冲洗干净的。由此，我们首先提出：冲洗后滤膜存在抗生素残留量。

建议用下列方法，可帮助冲洗滤膜较为彻底。相对对培养器的  培养基的阳性试验菌影响极微，可以使阳性对照管的细菌生长良好，同时又能准确的检出样品中可能存在的微量细菌。我们又提出：酶洗膜。

1.   样品溶液：取山东圣旺药业股份有限公司的硫酸庆大霉素注射液［10ml:0.2克（20万单位）］的20瓶，加至无菌0.9%氯化钠溶液300ml中，摇匀。

2.   灭活剂：苏州生纳生物科技有限公司的硫酸庆大霉素酶  （5ml/瓶），加无菌水1ml，摇匀。使成酶稀释液。

3.   冲洗液：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（500ml/瓶，共3瓶）。

4.   仪器

4.1.          集菌仪：浙江泰林生命科学有限公司HTY-601C。

4.2.          培养器：浙江泰林生命科学有限公司。

4.3.          培养器振荡仪：温州维科生物实验设备有限公司ZW-K。

5.   操作时，取冲洗液湿润培养器的滤膜。

6.   样品溶液通过滤膜。

7.   依次用冲洗液冲洗，每次100ml，开启培养器振荡仪，使成动态情况，泵尽液体（用集菌仪的蠕动泵把培养器的液体尽量排出）。

8.   用注射器分别加入3个培养器各1ml酶稀释液，覆盖滤膜整个表面，泵尽。此举可以去除滤膜上面和内部结构的90%硫酸庆大霉素的抗生素残留。

9.   再用注射器分别加入3个培养器各1ml酶稀释液，覆盖滤膜整个表面，停留10分钟。开启培养器振荡仪，转速适当。

10.            各加培养器培养基100ml，摇匀，加入已经活化的阳性   对照菌液大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（100CFU/ml）的1ml，摇匀。

11.            在37℃培养。每天上午、下午轻轻摇匀。

12.            结果表明：上述阳性对照管培养1天，生长良好。本试验适用于硫酸庆大霉素注射液的无菌检查。

13.            讨论：我们公司科研人员提出，冲洗后滤膜存在抗生素   残留量和酶洗膜两个新概念。抓住了抗生素无菌检查的试验关键点。首先确定影响试验的重点：滤膜存在抗生素残留量，又科学制定酶洗膜方法，使得无菌检查工作顺利进行。

附：硫酸庆大霉素注射液

培养器振荡仪

硫酸庆大霉素酶报告单

阳性管培养1天情况

苏州生纳生物科技有限公司

2025.06.19

附图：

硫酸庆大霉素注射液         

培养器振荡仪

硫酸庆大霉素酶报告单

阳性管培养1天情况