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抗生素药品在做无菌检查时,采用的集菌仪薄膜法有时遇到阳性对照管生长不佳的问题。
主要原因是每张薄膜冲洗量500ml是绝对不可能把滤膜上残留 的抗生素药物彻底冲洗干净的。
我们曾做过注射用利福霉素钠的无菌检查,因为该药物的外观 性状是暗红色的。冲洗500ml的量后,明显在滤膜上有淡淡的暗红颜色存在。证实了:500ml冲洗量是不可能彻底冲洗干净的。由此, 我们首先提出:冲洗后滤膜存在抗生素残留量。
建议用下列方法,可帮助冲洗滤膜较为彻底。相对对培养器的 培养基的阳性试验菌影响极微,可以使阳性对照管的细菌生长良好, 同时又能准确的检出样品中可能存在的微量细菌。我们又提出:酶洗膜。
1.样品溶液:广州创泰药业有限公司的阿奇霉素(水溶)原料 13 克,相当于注射用阿奇霉素0.5克/瓶的20瓶。加100ml无菌水 溶解,旋涡1分钟,帮助很好的溶解,转移至400ml的无菌0.9% 氯化钠溶液中,摇匀。
2. 灭活剂:苏州生纳生物科技有限公司的大环内酯酶冻干粉,加 无菌水6ml,摇匀。使成酶稀释液。
3. 冲洗液:pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(500ml/瓶,共3瓶)。
4. 仪器
4.1. 集菌仪:浙江泰林生命科学有限公司HTY-601C。
4.2. 培养器:浙江泰林生命科学有限公司。
4.3. 培养器振荡仪:温州维科生物实验设备有限公司ZW-K。
5. 操作时,取冲洗液湿润培养器的滤膜。
6. 样品溶液通过滤膜。
7. 依次用冲洗液冲洗,每次100ml,开启培养器振荡仪,使成 动态情况,泵尽液体(用集菌仪的蠕动泵把培养器的液体尽量排出)。
8. 用注射器分别加入3个培养器各1ml酶稀释液,覆盖滤膜整个 表面,泵尽。此举可以去除滤膜内部结构的90%阿奇霉素的抗生素 残留。
9. 再用注射器分别加入3个培养器各1ml酶稀释液,覆盖滤膜整 个表面,停留10分钟。开启培养器振荡仪,转速适当。
10. 各加培养器培养基100ml,摇匀,加入阳性对照菌液大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌(100CFU/ml)各1ml,摇匀。
11. 在37℃培养。每天上午、下午轻轻摇匀。
12. 结果表明:上述阳性对照管培养2天,生长良好。本试验 适用于注射用阿奇霉素的无菌检查。
13. 讨论:我们公司科研人员提出,冲洗后滤膜存在抗生素残留量和酶洗膜两个新概念。 抓住了抗生素无菌检查的试验关键点。 首先确定影响试验的重点:滤膜存在抗生素残留量,又科学制定 酶洗膜方法,使得无菌检查工作顺利进行。
附:大环内脂酶报告单,培养器振荡仪, 阿奇霉素原料,阳性管培养2天情况
苏州生纳生物科技有限公司 2024.12.26