阿奇霉素属大环内酯类抗生素，原料和口服制剂的微生物限度检查采用薄膜法检测，回收率应在50~200%的范围。 

   1.样品溶液：广州创泰药业有限公司的阿奇霉素原料（水溶），考虑到厂家添加相应的酸。取2.6克至20ml水溶解，加至80ml的pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，摇匀。经0.45mm滤膜除菌抽滤。

   2. 灭活剂：苏州生纳生物科技有限公司的大环内酯酶冻干粉，20u/瓶。 

   3. 操作 

   3.1. 酶洗滤膜2次

   3.1.1. 取样品溶液的100ml通过滤膜。 

   3.1.2. 取灭活剂1瓶，加3ml的无菌水溶解，摇匀。使成酶稀释 液。 

   3.1.3. 取酶稀释液1ml加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液， 摇匀，作为冲洗液。 

   3.1.4. 冲洗液依次冲洗滤膜，每次约100ml，泵尽。 

   3.1.5. 加 1ml 酶稀释液，覆盖滤膜的整个表面，泵尽。（用灭活剂 清洗滤膜内部的阿奇霉素残留量，可去除滤膜内部90%的残留量） 

   3.1.6. 再加 1ml 的酶稀释液，覆盖滤膜整个表面，停留10分钟， 泵尽。（用灭活剂再次去除滤膜表明及内部的阿奇霉素残留量） 

   3.1.7. 同上加入试验菌（大肠杆菌和金黄色葡萄球菌）。 

   3.1.8. 取出滤膜，正面向上，置TSA培养皿培养。 

   3.2 酶洗滤膜3次。 

   3.2.1.取样品溶液的100ml通过滤膜。 

   3.2.2.取灭活剂1瓶，加4ml的无菌水溶解，摇匀。使成酶稀释 液。 

   3.2.3.取酶稀释液1ml 加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液， 摇匀，作为冲洗液。 

   3.2.4.冲洗液依次冲洗滤膜，每次约100ml，泵尽。 

   3.2.5.加 1ml 酶稀释液，覆盖滤膜的整个表面，泵尽。 

   3.2.6.重复 3.2.5.。 

   3.2.7.再加 1ml 的酶稀释液，覆盖滤膜整个表面，停留10分钟， 泵尽。 

   3.2.8.同上加入试验菌（金黄色葡萄球菌）。 

   3.2.9.取出滤膜，正面向上，置TSA培养皿培养。 

   4.结果表明 

   4.1.大肠杆菌回收率100%。 

   4.2.金黄色葡萄球菌回收率

   4.2.1.二次酶洗膜回收率：62%。 

   4.2.2.三次酶洗膜回收率：77%。 

   5.讨论 根据回收率试验结果，用酶洗膜的方法收到很好的效果，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的回收率均在50%~200%范围。达到药典规定的 数值，可以用于阿奇霉素原料药及制剂的微生物限度检查的检测。 

苏州生纳生物科技有限公司 2024.12.12